眼庫操作技術指南
為規(guī)范眼庫操作技術，保障角膜質量，制定本操作技術指南。
一、捐獻者評估
為保證眼庫獲取角膜材料的質量，應當對捐獻者進行嚴格的評估。
（一）捐獻者年齡。捐獻者年齡一般不小于2周歲。
（二）獲取時間。眼庫應當在捐獻者死亡6小時以內(nèi)獲取角膜。冬季可延長到12小時。
（三）捐獻者醫(yī)學資料。查閱并評估捐獻者醫(yī)學資料，包括捐獻者現(xiàn)病史、既往史、家族史、個人史、疾病診斷及死亡原因、各種化驗報告及病理學報告、治療經(jīng)過及特殊用藥情況、眼部病史及檢查結果。
（四）捐獻者篩選。
1.絕對禁忌癥。捐獻者存在以下情況之一的，其角膜禁止用于角膜移植手術：
（l）死亡原因不明。
（2）傳染性和感染性疾?。杭毙圆《拘愿窝?，狂犬病，克雅?。–JD)、新變異型克雅?。╲CJD)或家族成員患克雅病，乙肝表面抗原（HBsAg）陽性，人類嗜T淋巴細胞白血病病毒（HTLV）Ⅰ型或Ⅱ型感染；丙型病毒性肝炎（HCV）血清學檢測陽性，人類免疫缺陷病毒（HIV）血清檢測陽性，亞急性硬化性全腦炎，進行性多灶性腦白質病，先天性風疹，急性腦病合并內(nèi)臟脂肪變性綜合征，急性病毒性腦炎或不明原因的腦炎或進行性腦病，急性敗血?。ňY、真菌血癥、病毒血癥），急性細菌性或真菌性心內(nèi)膜炎。
（3）惡性腫瘤：惡性腫瘤眼部轉移，急性白血病，急性播散性淋巴瘤。
（4）認知障礙。
（5）眼局部疾?。貉鄄繍盒阅[瘤，眼球或眼內(nèi)急性感染，包括角膜炎、鞏膜炎、虹膜炎、葡萄膜炎、玻璃體炎、脈絡膜炎、視網(wǎng)膜炎等。
（6）凝血功能障礙：血友病以及曾接受過人源性濃縮凝血因子治療的其他凝血功能障礙。
（7）HIV高危人群。
2.相對禁忌癥。捐獻者存在以下眼部疾病之一的，綜合評估決定是否獲取角膜用于移植：
（1）影響移植成功率的眼病，如角膜中央斑痕、圓錐角膜和球形角膜等；
（2）翼狀胬肉或其他累及角膜植片中央光學區(qū)的結膜或角膜表面疾?。?/p>
（3）既往有內(nèi)眼或眼前節(jié)手術史：屈光性角膜手術，如放射狀角膜切開術、角膜鏡片層間鑲入術、激光角膜切除術；眼前節(jié)手術，例如白內(nèi)障摘除術、人工晶體植入術和青光眼濾過手術；激光手術如氦激光小梁成形術、視網(wǎng)膜光凝術后等。
二、角膜獲取。
（一）獲取前的準備工作。
1.初步檢查尸體情況，查閱并復印死亡證明、有關病歷、知情同意書等，辦理捐獻相關手續(xù)。
2.采集靜脈血6～8ml用于HIV、乙肝、丙肝、梅毒、血常規(guī)和血型檢測。
3.準備手術器械包（眼球摘除包或角膜切除包）。
（二）全眼球摘除。
1.使用5%碘伏按照眼科手術要求范圍，消毒外眼皮膚三次；生理鹽水和新潔爾滅沖洗眼結膜囊各一次。
2.開瞼器開瞼；沿角膜緣剪開球結膜并向后分離；勾出內(nèi)直?。ɑ蛲庵奔。?，血管鉗夾住止端，然后剪斷；用視神經(jīng)剪剪斷視神經(jīng)，拉出眼球剪斷各條肌肉；將眼球放入保存瓶，角膜向上（保存瓶底部置生理鹽水慶大霉素濕紗布），用記號筆在保存瓶上標記眼別，放入保溫容器內(nèi)。
3.棉球填塞眶腔，裝入塑料或硅膠義眼片，整復上下眼瞼至瞼裂微閉狀態(tài)。
（三）原位角膜切除。
1.使用5%碘伏按照眼科手術要求范圍，消毒外眼皮膚三次；聚維酮碘沖洗結膜囊。
2.開瞼器開瞼；沿角膜緣剪開球結膜；用刀片自角膜緣向后輕刮，將筋膜組織刮向后，角膜緣后2～3mm處切開鞏膜，直達色素膜，但不能有眼內(nèi)容脫出；用角膜剪伸進切口，360°剪開，用角膜鑷提起鞏膜緣，將色素膜輕輕分開；將切取獲得的角膜片（角膜組織和2～3mm寬鞏膜）放入有角膜保存液的保存瓶中，角膜片內(nèi)皮面向上；用記號筆在保存瓶上標記眼別，放入保溫容器內(nèi)。
3.置塑料透明角膜片于眼表創(chuàng)面，調好位置，閉合眼瞼，恢復儀容。
三、角膜運輸
角膜應當分別包裝并密封于保存液或濕房環(huán)境中，在冷藏條件下（2～8°C）運輸。
四、角膜處理與保存
獲取的捐獻角膜應當盡快處理并選用最佳保存技術保存。
（一）眼庫實驗室內(nèi)角膜切取。
1.操作場地。在眼庫超凈工作臺內(nèi)或潔凈手術室中。
2.器械準備。無菌器械包，內(nèi)含治療巾一張，角膜剪一把、角膜鑷二把、刀片一個、彎盤一個、紗布、棉簽若干。
3.操作程序：
（1）1%碘伏浸泡眼球5分鐘（或1：2000慶大霉素浸泡15～20分鐘，1：5000升汞浸泡15～20分鐘）。
（2）超凈工作臺內(nèi)打開無菌器械包。
（3）無菌紗布環(huán)行包住眼球鞏膜部。
（4）用刀片全層切開角膜后2～3mm處鞏膜。
（5）角膜剪360°剪開，用鑷子取下帶鞏膜環(huán)的角膜（不含色素膜組織）。
（6）將角膜片放入有保存液的保存瓶中，密封后貼上標簽，標注角膜編號，保存日期和時間及保存方法。
（7）立即進行角膜內(nèi)皮細胞密度檢查并記錄。
（8）放入4℃恒溫冰箱保存?zhèn)溆谩?
（9）處理剩下的鞏膜。
（二）保存方法。角膜優(yōu)先進行中期保存，特殊情況可進行濕房保存，不能進行新鮮保存（中期保存和濕房保存）的角膜可采用非活性保存方法，如干燥保存、冷凍保存等。
1.中期保存：將切取的角膜片置于含中期保存液的保存瓶中，4℃恒溫冰箱保存，具體保存時間根據(jù)選用的保存液使用說明。
2.濕房保存：將完整無菌捐獻眼球置于密閉保存瓶中，內(nèi)置鹽水紗布，角膜面向上，4℃恒溫冰箱保存，原則上48小時內(nèi)使用。
3.干燥保存：將切取的角膜片置于含干燥劑的保存瓶中，4℃恒溫冰箱保存，原則上可以長期保存，具體保存時間根據(jù)保存劑確定。
五、質量評估
（一）大體檢查。主要包括以下內(nèi)容：
1.眼球的外形是否正常（如是否有前后葡萄腫）。
2.角膜是否有疤痕、劃傷、水腫。
3.眼壓是否正常，是否存在鞏膜破損。
（二）捐獻者傳染性疾病檢測。捐獻者HIV、HBsAg、HCV和梅毒血清學檢查結果應當均為陰性。
（三）裂隙燈顯微鏡檢查。
1.角膜上皮：是否有劃傷、干燥、點狀病變。
2.角膜基質：是否有水腫、疤痕、角膜中央透明區(qū)直徑（老年環(huán)大?。?。
3.角膜后彈力層：是否有皺折及皺折程度、內(nèi)皮細胞是否有血細胞附著等。
（四）全眼球角膜內(nèi)皮鏡檢查。使用非接觸角膜內(nèi)皮鏡檢查角膜內(nèi)皮，計數(shù)50個以上角膜內(nèi)皮細胞，并記錄檢查結果。
（五）保存角膜片的內(nèi)皮細胞學檢查。使用反射型角膜內(nèi)皮顯微鏡。角膜（內(nèi)皮面向上）放入保存液后立即使用反射型角膜內(nèi)皮顯微鏡檢查（從冰箱內(nèi)取出的角膜須復溫一小時后再檢查），計數(shù)三次取平均值，記錄檢查結果。
（六）角膜術前質量評估。角膜使用前，應當再次進行外觀檢查、裂隙燈顯微鏡檢查和角膜內(nèi)皮細胞學檢查，觀察保存液顏色和濁度是否有改變。
（七）不能用于全層角膜移植和角膜內(nèi)皮移植手術的角膜。
1.有相對禁忌癥的捐獻者角膜。
2.角膜內(nèi)皮細胞數(shù)小于2000個/mm2。
3.單純濕房保存超過48小時。
4.角膜中期保存液保存超過15天。
5.M-K液保存超過5天。
6.保存液顏色已有變化。
7.大于70歲的捐獻者角膜已保存10天以上。
（八）角膜數(shù)據(jù)記錄。眼庫應當將角膜的基本信息和各項檢測指標錄入中國人體角膜分配系統(tǒng)（以下簡稱分配系統(tǒng)）。尚未使用分配系統(tǒng)的眼庫，應當在本單位眼庫數(shù)據(jù)庫中記錄。
六、角膜分配
（一）核對角膜有關數(shù)據(jù)信息。在角膜分配前，應當核對捐獻角膜有關數(shù)據(jù)信息。
（二）啟動角膜分配。眼庫應當使用分配系統(tǒng)分配捐獻角膜，執(zhí)行分配結果。尚未啟用分配系統(tǒng)的眼庫，按照人體捐獻角膜分配原則在其服務范圍內(nèi)科學公平分配角膜。
（三）角膜再分配。對于分配后未用于移植，退回眼庫的角膜，應當嚴格記錄其運輸和保存的相關信息，并重新進行質量評估。經(jīng)評估可以繼續(xù)用于移植的，眼庫應當再次分配。
（四）角膜召回。分配后發(fā)現(xiàn)角膜存在質量問題或與移植受者匹配不佳的，眼庫應當及時召回，記錄相關信息。
七、眼庫感染控制與醫(yī)療廢物處理
眼庫應當根據(jù)國家相關法律、法規(guī)、規(guī)章等，制訂眼庫醫(yī)院感染管理相關制度和安全操作制度。眼庫的醫(yī)療廢物處理應當按照《中華人民共和國傳染病防治法》《醫(yī)療廢物管理條例》等有關規(guī)定執(zhí)行。